Test static oecd modificat

TEST STATIC OECD MODIFICAT

(Metoda C4-B)

1 Principiul Metodei

Un volum masurat de mediu mineral, ce contine o concentratie cunoscuta de substanta de testat ( 10 - 40 mg COD/l) ca singura sursa nominala de carbon organic, este inoculat cu 0,5 ml efluent /litru de mediu. Amestecul este aerat la intuneric sau lumina difuza la 22 sC ±2 sC.

Degradarea este urmata de analiza COD la intervale frecvente pe o perioada de 28 de zile. Gradul de biodegradare este calculat exprimand concentratia COD indepartata (corectata in functie de cea din martorul cu inocul) ca procent al concentratiei prezente initial. Gradul de biodegradare primara poate fi de asemenea calculat din analiza chimica suplimentara facuta la inceputul si sfarsitul incubarii.

2. DESCRIEREA METODEI

2.1. Aparatura:

(a)     Vase conice, de exemplu, 250 ml -2 litri in functie de volumul necesar pentru analiza COD

(b)            Agitatoare pentru vase conice, fie cu control automat al temperaturii, fie fara acest control, dar folosite intr-o incapere cu temperatura constanta si de putere suficienta pentru a mentine conditiile aerobe in toate vasele

(c)     Aparatura de filtrare cu membrane adecvate

(d)            Analizor COD

(e)     Oxigenometru

(f)     Centrifuga

Prepararea mediului mineral

Pentru prepararea solutiilor stoc vezi 1.6.2.

Se amesteca 10 ml de solutie (a) cu 800 ml apa de dilutie, se adauga cate 1 ml din solutiile (b) - (d) si se completeaza pana la 1 litru cu apa de dilutie

Aceasta metoda foloseste numai 0,5 ml efluent /litru ca inocul si prin urmare mediul poate necesita adaugarea de microelemente si factori de crestere. Acest lucru se face prin adaugarea cate    unui ml din fiecare din urmatoarele solutii/litru de mediu final.

Solutie cu microelemente

Sulfat de mangan tetrahidrat MnSO₄. 4H₂O 39,9 mg

Acid boric, H₃BO₃    57,2 mg

Sulfat de zinc heptahidrat ZnSO₄.7H₂O    42,8 mg

Heptamolibdat de amoniu (NH₄)₆MO₇O₂₄    34,7 mg

Complexonat de fier ( FeCl₃ acid etilendiamin-tetra-acetic) 100,0 mg

Se dizolva si se aduce pana la 1000 ml cu apa de dilutie

Solutie de vitamine

Extract de drojdie 15,0 mg

Se dizolva extractul de drojdie in 100 ml apa. Se sterilizeaza prin trecere printr-o membrana de 0,2 microni sau se pregateste proaspata.

2.3.Prepararea si preadaptarea inoculului

Inoculul este provenit din efluentul secundar al unei instalatii de tratare sau al unei instalatii de laborator care foloseste in special ape menajere. Vezi 1.6.4.2. si 1.6.5.

Se folosesc 0,5 ml/l de mediu mineral..

2.4. Pregatirea vaselor

De exemplu, se introduc cate 800 ml de mediu mineral in vase conice de 2 litri si se adauga volume suficiente de solutii stoc ale substantelor de testat si de referinta in fiecare vas pentru a obtine o concentratie a substantei chimice echivalenta cu 10-40 mg COD/l. Se verifica valorile pH si se ajusteaza, daca este cazul la 7,4. Se inoculeaza vasele cu 0,5 ml/l efluent de apa reziduala ( vezi 1.6.4.2.), De asemenea, se prepara probe de inocul pentru control, in mediu mineral, dar fara substanta chimica de testat sau de referinta.

Daca este cazul, se foloseste un vas pentru a verifica efectul inhibitor posibil al substantei chimice de testat, inoculand o solutie ce contine, in mediu mineral, concentratii comparabile ale ambelor substante chimice de testat si de referinta.

De asemenea, daca se cere, se mai foloseste un vas steril pentru a verifica daca substanta chimica de testat este degradata abiotic, prin utilizarea unei solutii neinoculate a substantei chimice (vezi 1.6.6).

Suplimentar, daca se banuieste ca substanta de testat este adsorbita semnificativ pe sticla, namol, etc, se face o estimare preliminara pentru a determina limita posibila a adsorbtiei si astfel adecvabilitatea testarii pentru substanta chimica respectiva

(vezi tabel 1).

Se utilizeaza un vas ce contine substanta de testat, inocul si agent de sterilizare.

Se completeaza volumele in toate vasele pana la 1 litru cu mediu mineral si, dupa amestecare, se ia o proba din fiecare vas pentru a determina concentratia initiala a COD (vezi Anexa II.4). Se acopera orificiile vaselor, de exemplu, cu folie de aluminiu, astfel incat sa se permita schimbul liber de aer intre vas si atmosfera inconjuratoare. Se monteaza apoi vasele pe agitatoare pentru inceperea testului.

2.5. Numarul de vase intr-o testare tipica

Vasele 1 si 2: suspensia de testat

Vasele 3 si 4: martor cu inocul

Vasul 5: procedura martor

De preferinta si cand este necesar se folosesc:

Vasul 6: martor steril abiotic

Vasul 7: martor de adsorbtie

Vasul 8: martor de toxicitate

Vezi si 1.6.7.

2.6. Efectuarea testului

In timpul testarii, se determina concentratiile COD in fiecare vas in duplicat la intervalele de timp cunoscute, suficient de frecvent pentru a putea determina inceputul ferestrei de 10 zile si indepartarea procentuala la sfarsitul ferestrei de 10 zile. Se ia numai volumul minim al suspensiei de testat necesar pentru fiecare determinare.

Inainte de prelevarea probelor, se completeaza pierderile cauzate de evaporare, adaugand apa de dilutie (1.6.1) in cantitatea necesara, daca este cazul. Se amesteca foarte bine mediul de cultura inainte de prelevarea unei probe si se asigura ca materialul ce adera pe peretii vaselor este dizolvat sau in suspensie, inainte de prelevare. Se filtreaza prin membrana sau se centrifugheaza (vezi Anexa II.4) proba, imediat dupa ce a fost prelevata. Se analizeaza probele filtrate sau centrifugate in aceeasi zi, sau se depoziteaza la 2-4sC timp de max 48 ore sau se mentin la temperaturi mai mici de -18sC pentru o perioada mai lunga.

3. Date si raportare

3.1. Interpretarea rezultatelor

Se calculeaza degradarea in procente la timpul t conform celor de la paragraful 1.7.1 (determinare COD) si, optional, de la 1.7.2.(analize specifice).

Se inregistreaza toate rezultatele pe fisele de date prevazute.

Validarea rezultatelor

Vezi 1.5.2.

3.3. Raportarea

Vezi 1.8.

4. Fisa de date

Un exemplu de fisa de date este prezentat mai jos