Norme tehnice pentru intretinerea si controlul tulpinilor de p. multocida

NORME TEHNICE

Pentru intretinerea si controlul tulpinilor de P. multocida

1. CARACTERISTICI principale

1.1. Tulpinile de Pasteurella multocida sunt bacterii Gram negative, de forma cocobacilara care se dezvolta usor in medii obisnuite de cultura, bulion si agar nutritiv.

2. simbol si provenienta tulpinilor

2.1. Se folosesc tulpini apatogene (CU) sau tulpini patogene de Pasteurella multocida din colectie (Ar, Or, Mh) provenite din focare de holera aviara. Tulpinile folosite sunt inregistrate prin denumirea de Pasteurella multocida si simbolul unitatii in care au fost izolate.

3. CARACTERisticile TULPINIlor

3.1. Caractere morfologice: bacterii cu forma polimorfa (cocobacili izolati sau grupati), imobili, nesporulati, capsulati. Se coloreaza Gram negativ, bipolar.

3.2. Caractere culturale: Pasteurella multocida creste in mediile lichide (descrise in Tehnica 1), la temperatura de 37⁰C si pH 7,2 - 7,8.

3.2.1. In mediile lichide prin dezvoltarea culturii apare o turbiditate uniforma in general sau mediul de cultura este transparent.

3.2.2. Prin invechirea culturii germenii se depun formand un depozit aderent care prin agitare se ridica sub forma de fuior.

3.2.3. Pe medii solide formeaza colonii mici transparente, uneori usor albastrui, aderente la mediu.

3.3. Caractere biochimice: Tulpinile de P. multocida fermenteaza glucoza, zaharoza, manitolul, fara productie de gaz; produc indol, nu fermenteaza lactoza, nu produc hidrogen sulfurat. De asemenea, nu hemolizeaza globulele rosii de oaie si nu cresc pe agarul McConkey.

3.4. Caractere serologice: Tulpinile de Pasteurella multocida se incadreaza dupa tipizarea serologica prin metoda Carter (reactia de inhibare indirecta a hemaglutinarii) in grupa A, iar dupa tipizarea serologica prin metoda Heddleston (reactia de imunodifuziune) in tipurile serologice 1, 3, 4, 5.

3.5. Caracterele de patogenitate: Se determina patogenitatea pe pasari (gaini, rate, gaste, curci) si soareci prin inocularea subcutanata a dilutiilor executate (10^-5 - 10^-10) de P. multocida. Pentru fiecare dilutie se vor inocula minimum 5 pasari sau soareci. La soareci doza cu care se inoculeaza este de 0,1 ml de dilutie, iar la pasari 1 ml/dilutie. Tulpina se cosidera patogena daca omoara soarecele sau pasarile la titruri mai mari de 10^-6. Tulpina PmCU este apatogena pentru soareci si pasari.

4. modul de obtinere A tulpinilor matca (TM) si de lucru (TL)

4.1. Tulpina matca (TM)

4.1.1. Tulpina matca se obtine prin multiplicarea bacteriilor-stoc, obtinute prin insamantare dintr-o singura colonie, pe unul din mediile descrise in Tehnica 1.

4.1.1.1. Continutul unei probe-stoc se inoculeaza in 200-250 ml mediu lichid.

4.1.1.2. Mediile inoculate se incubeaza la 37⁰C timp de 24 ore.

4.1.1.2.1. Culturile se controleaza bacterioscopic, bacteriologic, sterilitate fungica si concentratia germenilor vii (Tehnicile 3 si 4).

4.1.1.2.2. Tulpina matca trebuie sa fie pura din punct de vedere microbiologic si sterila fungic.

4.1.1.2.3. Titrul tulpinii matca trebuie sa fie de cel putin 1 x 10⁸ germeni vii/ml.

4.2. TULPIna DE LUCRU

4.2.1. Tulpina de lucru (TL) se prepara din tulpina matca prin cultivarea ei in unul din mediile descrise in Tehnica 1.

4.2.2. La prepararea tulpinii de lucru se va proceda conform pct. 4.1.1. de la prepararea tulpinii matca.

4.2.3. Tulpina de lucru se prepara in cantitati care sa asigure productia pe o perioada de cel putin 2 ani.

4.2.4. Suspensia ce constituie tulpina de lucru    se controleaza din punct de vedere al puritatii bacteriologice, sterilitatii fungice (Tehnica 3) si al concentratiei de germeni vii/ml (Tehnica 4)

4.2.4.1. Tulpina de lucru trebuie sa fie pura din punct de vedere microbiologic si sterila fungic.

4.2.4.2. Titrul tulpinii de lucru trebuie sa fie de cel putin 1 x 10⁸ UFC/ml.

5. modul de conditionare

. La culturile care au corespuns controlului calitativ si cantitativ se adauga ca protector 2% ser normal de cal sterilizat prin filtrare si controlat in prealabil din punct de vedere bacteriologic si fungic.

5.2. Cultura la care s-a adaugat substratul protector se repartizeaza in fiole de 2 ml    cate 1,2 ml/fiola.

5.3. Fiolele se eticheteaza sau stanteaza. Etichetele (stantele) vor avea inscrise urmatoarele:

simbolul tulpinii

initialele TM (tulpina matca) sau TL (tulpina de lucru)

numarul pasajului

data fiolarii

5.4. Fiolele se ambaleaza in cutii speciale pentru conservarea in azot lichid.

6. modul de conservare

6.1. Tulpinile matca si de lucru se conserva in azot lichid (la temperatura de -196⁰C).

7. valabilitatea

7.1. TM si TL conservate in azot lichid au termenul de valabilitate de 5 ani si respectiv de 3 ani de la data preparari.

8. NORMELE TEHNICE DE CONTROL PENTRU tm si tl

8.1. Prelevarea probelor

8.1.1. Probele se preleveaza prin sondaj de catre personalul laboratorului de control.

8.1.2. Numarul de probe care se preleveaza la fiecare pasaj de tulpina matca si de lucru depinde de marimea seriei (Tabelul 1).

8.1.3. Cand numarul de probe este insuficient se poate preleva un numar suplimentar de probe.

8.2. Controlul puritatii bacteriologice si sterilitatii fungice

8.2.1. Se executa la fiecare pasaj din tulpina matca si de lucru.

8.2.2. Controlul si interpretarea rezultatelor se face conform Tehnicii 3.

8.2.3. Tulpina matca si de lucru trebuie    sa contina numai germeni caracteristici morfocultural pentru P. multocida si sa fie sterila din punct de vedere bacteriologic si fungic.

8.3. Controlul concentratiei in germeni vii

8.3.1. Se efectueaza la fiecare pasaj de TM si TL.

8.3.2. Se foloseste metoda dilutiilor zecimale respectandu-se modul de lucru si interpretarea rezultatelor din Tehnica 4.

8.3.3. TM si TL conditionate in azot lichid trebuie sa contina cel putin 1 x 10⁸ germeni vii/ml.

9. EVIDENTe pentru pastrarea, CONTROLUL SI FOLOSIREA IN PRODUCTIE A cantitatilor de TULPINI preparate

9.1. Evidenta prepararii si folosirii in productie a tulpinii matca si de lucru se tine in registre speciale de catre laboratorul de productie.

9.2. Evidenta controalelor finale efectuate asupra tulpinii matca si tulpinii de lucru se tine in registrele laboratorului de control.

9.3. Tulpinile matca si de lucru se pot utiliza in procesul de productie al vaccinului numai dupa eliberarea fisei de control si certificatului de calitate.

10. NORME sanitare veterinare

10.1. Conform pct. 11 din Normele tehnice pentru prepararea vaccinului.

11. norme de protectia muncii

11.1. Conform pct. 12 din Normele tehnice pentru prepararea vaccinului.

Romvac company s.a.