	Biologie	Chimie	Didactica	Fizica	Geografie	Informatica
	Istorie	Literatura	Matematica	Psihologie

Biologie

Index » educatie » Biologie
» Efectuarea preparatelor microscopice

Efectuarea preparatelor microscopice

Efectuarea preparatelor microscopice

Tehnica efectuarii frotiului

1 ) Etalarea

din cultura bacteriana in mediu lichid se preleva cu ansa o picatura si se etaleaza in centrul lamei, in strat cat mai subtire, prin miscari circulare excentrice pe suprafata de 1-2 cm² fara a atinge marginile lamei;

din cultura pe mediu solid se preleva o cantitate numai prin atingerea unei colonii ( doar varful coloniei ! ) cu ansa si se depune in centru lamei langa o picatura de apa distilata sterila. Se omogenizeaza progresiv cultura in picatura de apa si se etaleaza;

prelevatele patologice fluide se etaleaza procedand ca pentru cultura in mediu lichid.

pentru produsele patologice fibrinoase se evita miscarile de du-te vino ale ansei pe aceeasi suprafata. Se depune in centrul lamei un mic flocon fibrino- purulent care se intinde in strat cat mai subtire prin miscari radiare si excentrice;

2) Uscarea

frotiurile se usuca. Se prefera uscarea rapida la bec de gaz

3) Fixarea

fixarea se face prin caldura: se trece lama cu frotiul in sus, cateva secunde prin flacara unui bec de gaz. Dosul mainii trebuie sa suporte atingerea lamei astfel incalzite. O incalzire mai puternica poate carboniza frotiul.

Colorarea frotiurilor

Coloratia Gram

se pune lama cu frotiul in sus pe stativul de colorare;

se coloreaza frotiul 30 sec - 1 min cu solutie de violet de gentiana ( colorare)

se varsa colorantul, se spala lama cu apa de robinet

se acopera lama cu solutie Lugol

( fixare) proaspata si se mentine 30 sec- 1 min;

se scurge solutia Lugol si se acopera lama cu solutia de decolorare (alcool- acetona) imprimandu- i miscari alternative de inclinare pana cand preparatul nu mai elibereaza colorant: cca 5- 10 sec pentru frotiurile subtiri, cca 10 sec pentru cele mai groase. Se stopeaza decolorarea prin spalare ingrijita cu apa.

se recoloreaza cu solutie de fucsina bazica timp de 30 sec. Pentru hemofili se prelungeste la 1- 2 min.

S.aureus

Group A, Streptococcus pyogenes

Sputum smear
Staphylococcus & Streptococcus pneumoniae

Escherichia coli/PMN

Peritoneal fluid Mixed
anaerobic infection

Urethral smear,
Neisseria gonorrhoeae

STEP 1: Flame slides to heat fix
STEP 2: Flood the entire slide with Fuchsin Ensure enough stain is added to keep the slides covered throughout the entire staining step.

STEP 3: Using a Bunsen burner, heat the slides slowly until they are steaming. Maintain steaming for 5 minutes by using low or intermittent heat (i.e. by occasionally passing the flame from the Bunsen burner over the slides) Caution: Using too much flame or heat can cause the slide to break.
STEP 4: Rinse the slide with water.
STEP 5: Flood the slide with 3% acid-alcohol and allow to decolorize for 5 minutes. Throughout the 5 minutes, continue to flood the slides with 3% acid-alcohol until the slides are clear of stain visible to the naked eye. To the right are examples of slides insufficiently and sufficiently flooded with 3% acid-alcohol.


STEP 6: Rinse the slide thoroughly with water and then drain any excess from the slides.
STEP 7: Flood the slide with the counterstain, Methylene Blue. Keep the counterstain on the slides for 1 minute.
STEP 8: Rinse the slide thoroughly with water.
If all steps are performed correctly you should have a slide that looks like this.