 |
|
 |  |
|
|
| |
 | Biologie | Chimie | Didactica | Fizica | Geografie | Informatica |
| Istorie | Literatura | Matematica | Psihologie |
Componentele structurale ale virusurilor joaca rol de antigen, provoaca raspuns imun din partea organismului infectat, ceea ce rezulta in producere de anticorpi.
Reactia antigen - anticorp este specifica, antigenul poate fi legat numai de anticorpul ce s-a produs ca raspuns la stimulul antigenic respectiv.
Aceste reactii pot fi folosite pentru:
detectarea unui antigen necunoscut cu ajutorul unui anticorp cunoscut (metode de diagnostic directe)
detectarea anticorpilor din serul bolnavilor cu antigene cunoscute (serodiagnostic, metode de diagnostic indirecte).
In cazul in care antigenul corespunde anticorpului, se formeaza complexul imun antigen-anticorp. In functie de cum se vizualizeaza/detecteaza formarea complexului imun exista mai multe metode bazate pe reactii antigen-anticorp:
reactii de precipitare: complexele imune formeaza precipitat
reactii de aglutinare: complexele imune formeaza aglutinat
RFC - se detecteaza consumarea complementului (acesta se leaga de complexele imune)
reactii in care elementul cunoscut este marcat - se detecteaza elementul marcat din complexul imun format
Antigenele: de natura coloidala (solubile), precipitinogene
Anticorpii: precipitine
Complexul imun: precipitat
Pot avea loc in medii lichide (metode folosite in bacteriologie) sau in medii solide.
Precipitinele, precipitogenele au capacitatea de a difuza in gel de agaroza. Unde se intalnesc in cantitati echivalente se formeaza precipitat vizibil cu ochiul liber.
1. Metoda Mancini - imunodifuzia simpla (radiala)
Elementul cunoscut (ag) se inglobeaza in gel de agaroza.
Gelul topit se toarna in placi, dupa solidificare se decupeaza godeuri.
In godeuri se introduce elementul necunoscut al reactiei (serul de cercetat: ac?).
Se incubeaza in camera umeda peste noapte la temperatura camerei. Anticorpii din serul cercetat difuzeaza in gel, daca corespund antigenului inglobat, are loc reactia antigen-anticorp.
In zona echivalentei se formeaza precipitat circular.
Se masoara diametrul precipitatului, se raporteaza la curbe etalon, astfel precizand-se cantitatea de anticorpi din ser (metoda cantitativa).
In cazul serodiagnosticului este posibila detectarea seroconversiei: se recolteaza probe de ser duble, la interval de 10 zile.
1
Figura nr. 1. Metoda Mancini
Godeurile nr. 1, 2 contin serurile pereche ale aceluiasi bolnav, recoltate la interval de 10 zile.
Diametrul precipitatului format in jurul godeului 2 este mai mare decat diametrul celui din jurul godeului 1. A avut loc seroconversia, diagnostic pozitiv pentru boala cercetata. Godeurile nr. 3 si 4 contin serurile recoltate de la un alt pacient, la interval de 10 zile. Cercurile de precipitat formate in jurul acestora au diametre identice, nu s-a detectat seroconversia. Desi acest pacient prezinta anticorpi specifici fata de antigenul cunoscut, lipsa seroconversiei indica faptul, ca pacientul a venit in contact cu antigenul respectiv in trecut, prezinta anticorpi fata de acesta la un nivel constant. Diagnosticul este negativ.
2. Metoda Ouchterlony - imunodifuzia dubla
Gelul de agaroza se toarna in placi, dupa solidificare se decupeaza godeuri sub forma de reozeta (un godeu central, mai multe periferice).
In godeul central se depune elementul cunoscut al reactiei (ag), in cele periferice se depun probele de cercetat.
Dupa incubare (ca si la metoda Mancini), antigenele, respectiv anticorpii difuzeaza in gel, se formeaza linii de precipitat.
Este metoda calitativa.
Figura nr. 2. Metoda Ouchterlony
Probele 3, 4, 6 pozitive, 1, 2, 5 negative.
Antigenele: de natura corpusculara, aglutinogene
Anticorpii: aglutinine
Antigenele corespund cu anticorpii + sunt prezente in cantitati echivalente: se formeaza aglutinatul (retea tridimensionala de complexe imune), vizibil cu ochiul liber sub forma de grunji.
Figura nr. 3. Retea tridimensionala ag-ac (echivalenta intre ag si ac)
1. Reactia de hemaglutinare, hemaglutino-inhibare (RHA-HAI)
se foloseste pentru detectarea virusurilor care prezinta pe suprafata hemaglutinine (HA)
HA: structura virala antigenica + aglutineaza hematiile
anticorpii formati fata de acestea sunt neutralizante (HA neutralizate cu anticorpi nu produc aglutinarea hematiilor)
Hemaglutinare
Inhibarea hemaglutinarii
Aplicatii ale RHA-HAI:
metoda Hirst: detectarea anticorpilor antihemaglutinina din serul bolnavilor de gripa convalescenti
metoda Smorodintev: detectarea antigenelor virusului gripal (HA) si determinarea serotipului din produsul patologic
2. Reactii de aglutinare pe suport
Elementul cunoscut al reactiei imune este atasat de un suport:
hematie - hemaglutinare pasiva (hematia nu participa direct in reactia ag-ac)
particula latex - latexaglutinare
proteina A extrasa din tulpina de stafilococ Cowan - coaglutinare
Copyright © 2024 - Toate drepturile rezervate
