DETERMINAREA PROTEINELOR PRIN METODA BIURET

DETERMINAREA PROTEINELOR PRIN METODA BIURET

Principiul metodei

Compusul Biuret H₂N - C - NH - C - NH₂ formeaza un complex cu

‌‌‌‌║ ║

O O

ionul Cu²⁺ in mediu basic cu o culoare violet .

In mod similar , compusii polipeptidici ( de la 4 unitati in sus ) formeaza complexi colorati cu ionul Cu²⁺ .

Intensitatea culorii este proportionala cu concentratia proteinelor si se determina spectrofotometric .

‌│ │

HN : NH

‌│ │

O=C C=O

│ │

R₁-HC Cu²⁺ CH-R₃

│ │

HN: :NH

│ │

O=C C=O

R₂-HC CH-R₄

│ │

Formarea complexului cupric cu electronii neparticipanti

ai atomilor de azot implicate in legatura peptidica

Reactivi

reactiv Biuret : 45 g tartrat de sodium si potasiu

15 g CuSO₄ x 5H₂O

8g NaOH

5 g KI

ad 1000 ml apa distilata

albumina serica bobina solutie 1 g %

Mod de lucru :

ml proba biologica se pun intr-o eprubeta curate . Se adauga 0 ml apa distilata si se agita bine . Se adaugaapoi 4 ml reactive Biuret , se agita si se lasa la temperature laboratorului 25 de minute .

Pregatirea martorului : peste 1 ml apa distilata se adauga 4 ml reactiv Biuret , se agita si se lasa la temperatura laboratorului 25 de minute .

Pregatirea standardului : la 1 ml solutie albumina serica bovina 1 g % se adauga 4 ml reactiv Biuret , se agita si se lasa la temperature laboratorului 25 de minute .

Se citeste absorbanta la 540 nm .

Calcul

Proteina totala g/dl = ΔAp / Δ A_St · 1