VERIFICAREA CONTAMINARII MICROBIENE DIN PRODUSE NESTERILE PE BAZA DE VIN SI PLANTE MEDICINALE

VERIFICAREA CONTAMINARII MICROBIENE DIN PRODUSE NESTERILE PE BAZA DE VIN SI PLANTE MEDICINALE

Scop

In acesta lucrare au fost monitorizate doua aspecte:

contaminarea cu microorganisme aerobe nepatogene (bacterii si fungi) sau patogene (Escherichia coli) pentru categoria de produse nesterile pe baza de vin si plante medicinale;

controlul eficacitatii antimicrobiene a vinurilor medicinale fata de tulpini bacteriene si fungice de referinta internationala.

Introducere

S-a efectuat un studiu complex privind contaminarea cu microorganisme aerobe, precum si eficacitatea antimicrobiena; au fost studiate urmatoarele produse pe baza de vin si plante medicinale, de tip «vin medicinal», cu administrare pe cale orala:

vin medicinal cu anghinare, monodoze x 50ml;

vin medicinal cu busuioc, monodoze x 50ml;

vin medicinal cu menta, monodoze x 50ml;

vin medicinal cu salvie, monodoze x 25 ml;

vin medicinal cu usturoi , monodoze x 50ml.

vin medicinal contra insomniei (cu paducel, musetel si melissa), monodoze x 50ml,

Studiul acestor produse a fost necesar pentru evaluarea cantitativa si calitativa a microorganismelor care le pot contamina in mod accidental, in timpul procesului de fabricatie.

Experimental

Verificarea contaminarii microbiene s-a efectuat prin ''Metoda numaratorii in placa'', iar activitatea antimicrobiana prin metoda aplicata pentru studiul ''Eficacitatii conservantilor antimicrobieni''

Pentru determinarea contaminarii vinurilor medicinale cu microorganisme aerobe nepatogene (bacterii, fungi ) si patogene (Escherichia coli), s-au utilizat ca medii de cultura:

agar nutritiv B (Casein, Soya, Bean, Digest, Agar);

agar Sabouraud cu dextroza (Dextrose agar);

agar H (MacConkey).

Etapele pentru 'Metoda numaratorii in placa' au fost:

efectuarea de dilutii seriate (1:10; 1:100; etc.) din produsele de analizat;

repartizarea in placi Petri a cate 1 ml din fiecare dilutie;

pentru bacterii, adaugare a 15-20 ml mediu de cultura agar B;

pentru fungi, adaugare a 15-20 ml mediu de cultura Sabouraud cu dextroza;

incubarea 5 zile a placilor Petri cu agar nutritiv B (30-35⁰C) si Sabouraud la (20-25⁰C);

calcularea numarului UFC/ml (Unitati Formatoare de Colonii) prin media aritmetica a numarului coloniilor din dilutiile luate in lucru.

Eficacitatea antimicrobiana a fost determinata pe microorganisme test precum: Staphylococcus aureus ATCC 6538; Escherichia coli ATCC 35218; Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Aspergillus niger ATCC 16404; Candida albicans ATCC 10231.

Activitatea antimicrobiana a produselor s-a testat dupa urmatorul protocol de lucru:

s-au preparat suspensii bacteriene si fungice cu o concentratie de 10⁸/ml microorganisme test, prin spalarea mediului de cultura inoculat cu tulpinile bacteriene si fungice, folosind solutie izotonica de clorura de sodiu;

numarul de microorganisme viabile din fiecare suspensie s-a determinat conform metodei numaratorii in placa;   

pentru fiecare 20 ml din proba de analizat se introduc cate 0,1 ml din fiecare suspensie bacteriana sau fungica, astfel incat se obtine o concentratie de 10⁵-10⁶ microorganisme-test/ml ;

testarea s-a efectuat prin metoda numaratorii in placa la intervalele de timp urmatoare: in momentul inceperii testarii (T ), la 14 zile (T ) si la 28 zile de la inoculare(T

la aceste intervale de timp s-a urmarit reducerea numarului initial de microorganisme viabile fata de timpul zero;

Criteriul de acceptabilitate recomandat este urmatorul:

numarul initial de bacterii trebuie sa se reduca cu un factor de 10³/ml la 14 zile. Dupa acest interval nu este admisa cresterea bacteriilor;

numarul initial de fungi trebuie sa se reduca cu un factor de 10¹/ml la 14 zile. Dupa acest interval nu este admisa cresterea fungilor ;

Rezultate si discutii

Rezultatele obtinute la verificarea vinurilor medicinale din punct de vedere al contaminarii microbiene cu bacterii, fungi sau Escherichia coli sunt prezentate in Tabelul nr.1 (Rezultate privind contaminarea microbiana a vinurilor medicinale.

Din analiza rezultatelor se poate observa ca vinurile medicinale cu busuioc, menta si usturoi nu au fost contaminate cu bacterii sau fungi si nu s-a identificat tulpina de Escherichia coli. Vinurile medicinale cu anghinare, cu salvie si Lin Somn-Vin medicinal contra insomniei, desi au prezentat contaminare cu 2x10¹, 3x10², respectiv 4x10¹ UFC/ml bacterii, s-au incadrat in limita de admisibilitate; de asemenea, aceste produse nu au fost contaminate cu fungi sau cu Escherichia coli.

Toate produsele analizate s-au incadrat in limitele de admisibilitate a contaminarii microbiologice recomandate de Farmacopeea Europeana in vigoare.

Activitatea antimicrobiana a fost testata la toate vinurile medicinale luate in studiu, fiind determinata pe microorganisme-test precum: Staphylococcus aureus ATCC 6538; Escherichia coli ATCC 35218; Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Aspergillus niger ATCC 16404; Candida albicans ATCC 10231. Rezultatele obtinute la testarea activitatii antimicrobiene sunt prezentate in Tabelele nr.2, 3, 4, 5, 6 si Graficele 1, 2, 3, 4, 5.

Ipoteza de lucru s-a confirmat: vinurile medicinale obtinute prin macerarea in vin a unor plante care contin uleiuri volatile (busuioc, menta, salvie si usturoi) prezinta activitate antimicrobiana naturala. Pentru produsele de tip vin medicinal cu anghinare si Lin Somn-Vin medicinal contra insomniei'' nu a fost evidentiata activitate antimicrobiana fata de tulpinile bacteriene si fungice testate .

Rezultatele obtinute la testarea activitatii antimicrobiene a vinurilor medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi pentru tulpina de Staphylococcus aureus ATCC 6538 sunt prezentate in Tabelul 2 si Graficul 1, pentru tulpina de Escherichia coli ATCC 35218 sunt prezentate in Tabelul 3 si Graficul 2, pentru tulpina de Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 sunt prezentate in Tabelul 4 si Graficul 3, pentru tulpina de Aspergillus niger ATCC 16404 sunt prezentate in Tabelul 5 si Graficul 4, iar pentru tulpina de Candida albicans sunt prezentate in Tabelul 6 si Graficul 5.

Fata de tulpinile de Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 35218 si Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 vinurile medicinale pe baza de plante medicinale ce contin ulei volatil au avut activitate antimicrobiana si au redus numarul de bacterii cu un factor de cel putin 10³/ml in decurs de14 zile, reductia fiind log = 4 iar fata de tulpinile de Aspergillus niger ATCC 16404 si Candida albicans ATCC 10231, vinurile medicinale cu plante ce contin uleiuri volatile au redus numarul de fungi cu un factor de cel putin 10¹/ml in decurs de14 zile, reductia fiind log = 2; dupa acest interval tulpinile nu s-a mai dezvoltat.

Pentru produsele Lin Somn - vin medicinal contra insomniei si vin medicinal cu anghinare nu a fost evidentiata activitate antimicrobiana fata de tulpinile bacteriene si fungice testate.

Concluzii

La verificarea vinurilor medicinale din punct de vedere al contaminarii microbiene cu bacterii, fungi sau Escherichia coli toate produsele analizate s-au incadrat in limitele de admisibilitate a contaminarii microbiologice recomandate de Farmacopeea Europeana in vigoare.

Testarea activitatii antimicrobiene la toate vinurile medicinale luate in studiu, determinata pe microorganisme-test, a confirmat ipoteza de lucru:

vinurile medicinale obtinute prin macerarea in vin a unor plante care contin uleiuri volatile (busuioc, menta, salvie si usturoi) prezinta activitate antimicrobiana naturala.

pentru produsele de tip vin medicinal cu anghinare si Lin Somn - Vin medicinal contra insomniei (care are in formula de preparare frunza, floare sau fruct de paducel, roinita si musetel) nu a fost evidentiata activitate antimicrobiana fata de tulpinile bacteriene si fungice testate.

Vinurile medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi au avut activitate antimicrobiana fata de tulpinile bacteriene si fungice de referinta internationala, datorita materiilor prime din formula de preparare si nu a unui conservant antimicrobian care sa se adauge in formula de preparare.

Bibliografie

H.J.GLOWANIA, C. RAULIN. M. SWOBODA: The effect of chamomile in healingwounds: A clinical, double-blind study, Zeit Fur Hauttrankheiten, 17(62), 1262-1271 (1987)

N.A. LEE, C.A. REASNER: Beneficial effect of chromium picolinate on serum cholesterol and apolipoprotein fractions in human subjects, Western J. Med., 152, 41-45 (1993)

E. PETRESCU: Terapia cu struguri si vinuri medicinale, Ed. Polirom, Bucuresti (2002)

J.E. MANSON, F.B. HU, J.W. RICH-EDWARDS: A Prospective study of walking as compared with vigorous exercise in the prevention of coronary artery disease in women, New Engl. J Med, 341, 9,650-658 (1999)

SILAGY, A. NEIL: A meta-analysis of the effect of garlic on blood pressure, J Hypertence, 12,463-468 (1994)

M. STENGLER: Remediile naturister ale medicului homeopat, B.I.C., Ed. All (2005)

R.C. AGARWAL, S.P. SINGH, R.K. SARAN: Clinicaltrial of guggulipid - A new hypolipidemic agent of plant origin in primary hyperpidemia, Indian Journal of Medical Research, 84.

Cuvinte cheie: microorganism, contaminare, vin medicinal

Tabelul nr.1.- Rezultate privind contaminarea microbiana a vinurilor medicinale

Tabelul nr.2.- Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinurile medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi (plante macerate in vin), inoculate cu Staphylococcus aureus ATCC 6538

Tabelul nr.3.- Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinurile medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi (plante macerate in vin), inoculate cu Escherichia coli ATCC 35218

Tabelul nr.4.- Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinurile medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi (plante macerate in vin), inoculate cu Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

Tabelul nr.5.- Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinurile medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi (plante macerate in vin), inoculate cu Aspergillus niger ATCC 16404

Tabelul nr.6.- Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinurile medicinale cu busuioc, menta, salvie si usturoi (plante macerate in vin), inoculate cu Candida albicans ATCC 10231.

Graficul nr.1.-Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinul medicinal cu salvie (planta macerata in vin), inoculat cu Staphylococcus aureus ATCC 6538

Graficul nr.2.-Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinul medicinal cu salvie (planta macerata in vin), inoculat cu Escherichia coli ATCC 35218

Graficul nr.3.-Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinul medicinal cu salvie (planta macerata in vin), inoculat cu Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027

Graficul nr.4.-Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinul medicinal cu salvie (planta macerata in vin), inoculat cu Aspergillus niger ATCC 16404

Graficul nr.5.-Testarea eficacitatii conservantilor antimicrobieni naturali din vinul medicinal cu salvie (planta macerata in vin), inoculat cu Candida albicans