DETERMINAREA ACTIVITATII AMILAZEI SERICE

DETERMINAREA ACTIVITATII AMILAZEI SERICE

Amilaza , 1,4-glucanhidrolaza ( E.C.3.2.1.1. ) catalizeaza hidroliza polizaharidelor solubile formate din unitati de glucoza legate prin legaturi α 1-4 glucozidice .

Amilaza actioneaza asupra amidonului prin scindarea legaturilor

1-4 glucozidice , producand fragmentarea substratului in molecule mai mici : dextrine , maltodextroze , maltoza , glucoza . In functie de greutatea moleculara a dextrinelor rezultate , acestea dau cu iodul coloratii diferite , dupa cum urmeaza :

Albastru - amilodextrine

Rosu - eritrodextine

Galben - flavodextrine

Dextrinele cu mase moleculare mici ( acrodextrine ) nu dau reactii de culoare cu iodul .

Principiul metodei

Amidonul ramas nehidrolizat in urma actiunii enzimei din proba biologica este dozat colorimetric cu iod .

Reactivi

Substrat tamponat : 13,3 g Na₂HPO₄ si 4,3 g acid benzoic . Se dizolva in 250 ml apa distilata la fierbere . Se adauga 5 ml suspensie rece continand 200 mg amidon . Se lasa sa se raceasca . Se aduce la 500 ml cu apa distilata . Se pastreaza la 4⁰C ( solutia trebuie sa fie limpede ) .

Solutie stoc iod : 3,56 g KIO₃ si 45 g KI . Se dizolva in 800 ml apa distilata . Se adauga prin picurare 9 ml solutie HCl 12 M agitand continuu . Se aduce la 1 l cu apa distilata . Se pastreaza la + 4⁰C timp de maxim un an .

Solutie de iod pentru determinari : Se face o dilutie din solutia stoc 1:10 cu apa distilata . Se pastreaza la + 4⁰C timp de maxim un an .

Solutie acid clorhidric 1 N .

Mod de lucru

Se folosesc baloane cotate de 25 ml .

Calcul

( A_M - A_P ) / A_M x 800 = unitati amilazice /dl proba