DETERMINAREA ACTIVITATII ENZIMATICE A PEPSINEI

DETERMINAREA ACTIVITATII ENZIMATICE A PEPSINEI

Determinarea activitatii enzimatice a pepsinei se bazeaza pe hidroliza albusului de ou de catre enzima . Activitatea enzimatica a pepsinei se exprima in grame albus de ou hidrolizat in conditii standard , de un gram de pepsina .

Materiale necesare

substrat enzymatic : doua oua proaspete de gaina ( cu o vechime de cel mult 7 zile ) se fierb 10 minute si se racesc ;albusul se separa de galbenus si se preseaza prin sita IV . Albusul maruntit se preseaza intre hartii de filtru pana cand nu mai lasa urme umede .

proba de determinat : 50 mg pepsina se dizolva in 100 ml amestec format din 2,5 ml acid clorhidric 100 g/l si 97,5 ml apa distilata .

Mod de lucru

Peste proba de determinat incalzita la 45-50⁰C se adauga 10 g substrat enzimatic pregatit ca mai sus . Se mentine amestecul la temperature de 45-50⁰C timp de 1 ora si 30 min. , agitand din 15 in 15 min. lichidul se decanteaza , iar albusul nehidrolizat se centrifugheaza . Reziduul se preseaza usor intre hartii de filtru pana cand nu mai lasa urme umede si se cantareste pe balanta analitica .

Calcul

Masa albusului de ou hidrolizat ( in grame ) rezulta din diferenta dintre masa albusului de ou luat in lucru si masa albusului de ou ramas nehidrolizat ( reziduul ) .