Activitatea antimicrobiana “in vitro”

Se determina activitatea antimicrobiana in vitro pentru cunoasterea :

cunoasterea sensibilitatii/rezistentei unei tulpini bacteriene la substantele antimicrobiene

concentratiilor de substanta antimicrobiana in lichide organice si tesuturi

Determinarea sensibilitatii la antibiotice se poate efectua prin”

Metoda difuzimetrica

Metoda dilutiilor

Metoda Etest

Metode auromate

CMI-concentratia minima inhibitorie reprezinta cea mai mica concentratie de substanta antibimicrobiana  care inhiba dezvoltarea unei culturi microbiene

CMB- concentratie minima bactericida- reprezinta cea mai mica concentratie de substanta antibimicrobiana  care dostruge o cultura microbiena.

Antibiograma –metoda difuzimetrica (K Bauer)

Mediul “Muller Hinton Agar”

Mediul “Muller Hinton Agar” cu 5% sange, pentru Steptococcus spp., Streptococcus pneumoniae

“Haemophylus Test Medium” pentru Haemophylus spp.

Grosimea mediului in placi este critica: trebuie sa fie de 4 mm.

se efectueaza un inocul concentrat 0,5 pe scala Mc Farland. In eprubeta speciala pentru densitometru se repartizeaza aprox. 3 ml solutie salina izotona sterila. Cu ansa se preleva 5 colonii bine individualizate din cultura de 18- 24 ore a bacteriei de cercetat. Se transfera coloniile in eprubeta omogenizand cu grija masa bacteriana pentru a obtine o suspensie bacteriana cat mai omogena. Concentratia bacteriana se etaloneaza la densitometru la citirea 0,5. Se ajusteaza adaugand dupa caz fie solutie salina fie masa bacteriana.

Din momentul etalonarii placile trebuie inoculate in interval de 15 min.

se imerseaza tamponul in suspensia bacteriana etalonata a bacteriei de testat. Se scurge excesul de lichid prin rotirea ferma a tamponului pe peretii eprubetei. Se descarca tamponul pe toata suprafata placii in striuri paralele succesiv in 3 directii rotind placa cu cate 60⁰. In final se parcurge cu varful tamponului toata circumferinta mediului. In acest mod inoculul este dispesat uniform.

Sau se descarca inoculul pe suprafata placii, se roteste usor placa astfel inact sa se inunde intreaga suprafat, se indeparteaza excesul de lichis

placa insamantata se lasa 3-5 min (niciodata mai mult de 15 min) pentru adsorbtia inoculului.

se depun discurile de antibiotice la distante de minimum 15 mm de marginea placii si 30 mm intre centrele a doua discuri vecine folosind o pensa sau un dispenser automat. Pe o placa cu diametrul de 9 cm pot fi dispuse 5 discuri iar pe o placa cu diametrul de 15cm cel mult 12 discuri. Preseaza ferm cu pensa fiecare disc in parte pe suprafata mediului.

se incubeaza imediat placile la 35⁰ C pentru 16-18 ore

incubrea prelungita pana la 24 ore pentru :

oxacilina, vancomicina - staphylococcus spp

vancomicina - enterococcus spp.

Streptococcus spp

Citirea si interpretarea rezultatelor

Se masoara cu rigla gradata in mm. diametrul zonelor de inhibitie completa, in lumina reflectata. In cazul mediilor transparente se masoara pe spatele placilor, iar in cazul mediilor cu sange pe suprafata agarului. Se evita la masurare zonele eventual afectate de apropierea marginii placii sau

interactiunea intre doua discuri. Se vizeaza inhibitia completa, facand abstractie de hemoliza pe mediile cu sange si de coloniile periferice, fine, vizibile doar la o scrutare atenta prin lupa a zonei. Coloniile mari din zona de inhibitie trebuie identificate si retestate: pot fi variante rezistente sau contaminanti. Se vizeaza cresterea masiva facand abstractie de valul invaziv format de Proteus si de cresterea pulverulenta in zonele sulfamidei si trimetoprimului.

Diametrele zonelor de inhibitie se raporteaza la tabelul interpretativ oferit de CLSI/2009, transformandu- se in categorii de sensibilitate (sensibil, intermediar, rezistent).

dispenser pt antibiograma

E-TEST

Modul de desfasurare a lucrarii practice

studentii primesc manuscrisul cu „Activitatea antimicrobiana in vitro “

Lp se desfasoara interactiv

Fiecare student masoara diametrele antibiogarmelor, noteaza in caiet si stabileste folosind standardul CLSI/2009, S,I,R

Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri

Bibliografie

Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006

Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg,  editata American Society for Microbiology, 2004

Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington C Winn Stephen D. Allen Gail L. Woods William M. Janda Paul C. Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005

Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray ,Patrick R. Murray (Editor)

Visit Amazon's Patrick R. Murray Page

Find all the books, read about the author, and more.

See search results for this author

Are you an author? Learn about Author Central

Ellen Jo Baron ,Ellen Jo Baron (Editor)

Visit Amazon's Ellen Jo Baron Page

Find all the books, read about the author, and more.

See search results for this author

Are you an author? Learn about Author Central

Michael A. Pfaller , Fred C. Tenover , Robert H. Yolken, editura ASM, 2007

Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing”.M 100, S19

CLSI /2009