MICROBIOLOGICAL CONTROL OF GOAT MILK FROM SIBIU AREA REGARDING THE HYGIENE ASSURANCE AND FOOD SAFETY CONTROLUL MICROBIOLOGIC AL LAPTELUI DE CAPRA DIN JUDETUL SIBIU IN VEDEREA ASIGURARII IGIENEI SI SIGURANTEI ALIMENTARE

MICROBIOLOGICAL CONTROL OF GOAT MILK FROM SIBIU AREA REGARDING THE HYGIENE ASSURANCE AND FOOD SAFETY

CONTROLUL MICROBIOLOGIC AL LAPTELUI DE CAPRA DIN JUDETUL SIBIU IN VEDEREA ASIGURARII IGIENEI SI SIGURANTEI ALIMENTARE

Key words: lapte de capra, siguranta alimentara, Salmonella

Materials and methods

Calitatea si siguranta produselor alimentare au devenit un drept al consumatorilor, cu efecte directe asupra calitatii vietii, iar problematica axata pe calitatea si siguranta produselor se afla in centrul atentiei organismelor constituite pentru apararea intereselor consumatorilor.

Strategia UE privind siguranta alimentelor are la baza patru elemente importante:

• norme privind siguranta alimentelor si a furajelor pentru animale
• consultanta stiintifica independenta si accesibila publicului
• masuri de aplicare a normelor si de control al proceselor
• recunoasterea dreptului consumatorului de a alege pe baza unor informatii complete privind originea si continutul alimentului.

Laptele contine circa 87,5% apa, iar restul de 12,5% este substanta uscata totala. Componentii laptelui se gasesc in diferite forme: in emulsie (grasime, pigmenti si vitamine liposolubile), in dispersie coliodala (substantele proteice) si in solutie (lactoza, saruri minerale, pigmenti si vitamine hidrosolubile). Proteinele din lapte sunt formate din cazeina (80%-85%), lactalbumina (10%-12%) si lactoglobulina (5%-8%). Ele reprezinta elementul cel mai valoros al laptelui, sunt proteine complete, adica contin cei opt aminoacizi esentiali.

In vederea evitarii contaminarii mediului si a probei luata in lucru,se recomanda a se lucra in incaperi speciale sau in nisa cu flux laminar.Anumite produse cunoscute a contine foarte putine microorganisme se vor examina totdeauna primele, urmate de alt produs cunoscut ca avand o contaminare mai ridicata.

Probele se vor manipula astfel incat sa se evite orice risc de contaminare. Pentru a se realiza aceasta se vor lua urmatoarele precautii:

- cand nu se lucreaza in nisa,se lucreaza in vecinatatea flacarii;

- laptele va fi colectat in recipiente sterile

- orice instrument care este folosit trebuie sa fie steril.

S-au luat 25 g (ml) din proba de analizat si s-a adaugat 225 ml mediu de preimbogatire (bulion semi-Fraser) si s-a introdus in termostat la 30ºC ±1° C,pentru incubare timp de 24h ± 2h. Dupa incubarea suspensiei initiale s-au transferat 0,1 ml din cultura obtinuta intr-o eprubeta cu 10 ml mediu de imbogatire secundara (bullion Fraser).

Se incubeaza mediul insamantat,timp de 48 h ± 2 h la 35°C sau 37ºC.

Placile cu mediu de izolare selective insamantate (3 placi corespunzatoare locului de provenienta: Rasinari, Cristian si Miercurea Sibiului, comune din judetul Sibiu) se pun la incubat la 37°C timp de 24 ore,cu capacul in jos nu mai mult de 6 in coloana si sa nu fie in contact cu peretii si nici cu partea superioara a incubatorului. Coloniile tipice de Salmonella au fost crescute pe agar Wilson-Blaire si pe agar Kristensen.

Pentru confirmare,din fiecare placa cu fiecare din cele doua medii selective,se ia cel putin o colonie considerate a fi tipica sau suspecta. Daca se gaseste o placa cu mai putin de cinci colonii tipice sau suspecte,se retin toate coloniile tipice sau suspecte. Se insamanteaza coloniile selectate,pe suprafata uscata in prealabil a placilor cu agar nutritive,astfel incat sa se obtina dezvoltarea de colonii izolate. Se incubeaza placile astfel inoculate,in termostat la 37±1°C,timp de 24±3 ore. Pentru confirmarea biochimica si serologica se folosesc culturi pure.

Cu ajutorul unei anse se insamanteaza,cu fiecare din culturile obtinute din coloniile retinute,urmatoarele medii: Agar TSI, Agar cu uree, Mediu pentru decarboxilarea L-lizinei. Se insamanteaza coloana agarului prin intepare,iar panta prin striere. Se incubeaza in termostat la 37±1°C,timp de 24±3 ore.

Pentru a evidentia ß-galactoza se disperseaza o ansa din colonia suspecta, intr-o eprubeta ce contine 0,25 ml solutie salina,se adauga o picatura toluene si se agita eprubeta.Se introduce eprubeta in baia de apa termoreglabila,reglata la 37°C si se lasa sa stea cateva minute (aproximativ 5 minute). Se adauga 0,25 ml reactiv pentru evidentierea ß-galactozidazei si se amesteca. Se reintroduce eprubeta in baia de apa termoreglabila,reglata la 37° C si se lasa 24±3 ore.

Pentru reactia Voges-Proskauer (VP) pe mediu se insamanteaza din colonia suspecta, intr-o eprubeta ce contine 3ml mediu VP.Se incubeaza in termostat la 37±1°C,timp de 24±3 ore. Dupa incubare,se adauga doua picaturi din solutia de creatina,trei picaturi din solutia alcoolica de 1-naftol si apoi doua picaturi din solutia de hidroxid de potasiu,agitand dupa adaugarea fiecarui reactiv.

Pentru evidentierea indolului pe mediu se insamanteaza o eprubeta ce contine 5 ml mediu triptona/triptofan,cu colonia suspecta. Se incubeaza in thermostat la 37 ±1°C, timp de 24±3 ore.Dupa incubare se adauga 1 ml reactiv Kovacs.

Results and Discussion

Confirmarea microbiologica pe mediul de cultura Agar TSI este indicata pe coloana, astfel: -galbena-glucozo-pozitiva (fermentarea glucozei); rosie sau neschimbata - glucozo-negativa(lipsa fermentarii glucozei); neagra-formare de hidrogen sulfurat, bule sau fisuri - formare de gaz din glucoza, si de panta-galbena-lactozo si/sau zaharozo-pozitiva (fermenteaza lactoza si/sau zaharoza), rosie sau neschimbata - lactozo si zaharozo-negativa (nu fermenteaza nici lactoza si nici zaharoza). Culturile tipice de Salmonella corespund unei pante alcaline (rosie),cu formarea (in 90% din cazuri) hidrogenului sulfurat(innegrirea agarului). Atunci cand se izoleaza o Salmonella lactoza pozitiva,panta agarului TSI este galbena.In consecinta,o confirmare preliminara a culturilor de Salmonella nu trebuie sa se bazeze doar pe rezultatele obtinute pe agarul TSI.

Confirmarea microbiologica pe mediul de cultura Agar cu uree

In cazul reactiei positive,descompunerea ureei produce degajarea amoniacului,facand sa vireze rosu de fenol la roz,apoi la rosu inschis.Reactia este deseori vizibila dupa 2-4 ore.

Confirmarea microbiologica pe mediul pentru decarboxilarea L-lizinei

Turbiditatea si o coloratie purpurie,dupa incubare,indica o reactie pozitiva,o culoare galben indica o reactie negative.

Confirmarea microbiologica pe mediul de cultura pentru evidentierea ß-galactozei

O culoare galbena indica o reactie pozitiva.Reactia este de obicei vizibila dupa 20 minute.

Confirmarea microbiologica pe mediul de cultura pentru reactia Voges-Proskauer (VP)

Formarea unei coloratii roz pana la rosu aprins,intr-un interval de 15 min.indica o reactie pozitiva.

Confirmarea microbiologica pe mediul de cultura pentru evidentierea indolului

Formarea unui inel rosu indica o reactie pozitiva,un inel galben-brun indica o reactie negativa.

Confirmarea microbiologica pe mediile de cultura poate fi evidentiata in tabelul nr. 1.

Tabel nr. 1

Confirmarea microbiologica pe mediile de cultura

a)Preluat din referinta SR EN ISO 6579/2003

b) Aceste procente indica ca nu toate izolatele de serotipuri de Salmonella dau reactii marcate cu + sau -. Aceste procente pot varia intre si in cadrul serotipurilor din cauza otravirii serotipurilor de la diverse componente ale alimentului.

c) Procentele nu sunt date in literatura publica

d) Salmonella Typhi este anaerogenica

e) Salmonella enterica subspecia arizonae da o reactie lactozo-pozitiva sau negative,dar este intotdeauna ß - galactozidazo-pozitiva. Pentru studiul acestor specii este necesara efectuarea de teste suplimentare.

Figura nr. 1

Confirmarea microbiologica pentru specia de Salmonella Typhi

Figura nr. 2

Confirmarea microbiologica pentru specia de Salmonella Paratyphi A

Figura nr 3

Confirmarea microbiologica pentru specia de Salmonella Paratyphi B

Figura nr. 4

Confirmarea microbiologica pentru alte specii prezente

Conclusions

Asa cum reiese din testele prezumtive se constata ca exista urme de Salmonella in laptele de capra recoltat din .. ceea ce contravine standardelor in vigoare. Acest microorganism poate fi eliminat prin metode specifice astfel incat sa nu ajunga in consumul public. Salmonella constituie unul din cei mai virulenti factori de contaminare pentru materia prima din industria alimentara dar prin metode specifice ea poate fi eliminata. Valorile nu sunt semnificative astfel incat nu constiuie un pericol iminent de contaminare.

References