Mitocondriile

Mitocondriile

Mitocondriile sunt organite membranare prezente in toate celulele cu metabolism aerob, cu exceptia eritrocitului adult. Acestea contin sisteme enzimatice necesare oxidarii materialelor nutritive, sintezei moleculelor de ATP si cuplarea acestor doua porcese (fosforilarea oxidativa). Mitocondriile sunt generatoare de energie necesara derularii proceselor celulare.

I.1. Localizare: in intreaga citoplasma, cu predilectie la polii celulei sau perinuclear in momentele de intensa activitate de sinteza.

I.2. Numar: numarul mitocondriilor depinde de gradul activitatii celulare; sunt mult mai numeroase in celulele cu activitate functionala intensa (ex. hepatocite).

I.3. Dimensiune: lungimea miticondriei este de aproximativ 7µm iar grosimea de 0,5µm. Cu cat o celula este mai activa cu atat mitocondriile sunt mai mari.

I.4. Foma: mitocondriile pot avea o forma alungita in celulele pancreasului exocrin sau granulara in hepatocite.

Fig. 1 - Localizarea mitocondriei in celula

1. nucleu, 2. Nucleoli, 3. Robozomi, 4. Vezicule, 5. REG, 6. aparat Golgi

7. citoschelet, 8. REN.9. mitocondrie, 10. Vacuole, 11. citoplasma12. lizozomi, 13. centrioli

I.5. Microscopia fotonica a mitocondriilor

In microscopia fotonica cu contrast de faza mitocondriile apar foarte net, in special dupa coloratii supravitale cu verde Janus, negru Janus, albastru de metil. Acestea se deplaseaza in masa citoplasmatica, se deformeaza si dau muguri laterali care se pot detasa.

Pe preparatele fixate si colorate cu fuxina acida (tehnica Altman), violet cristal (tehnica Benda), cu lacuri de hematoxilina prin coloratii regresive, mitocondriile apar sub diverse forme, in functie de tipul celular si anume: forma alungita in celulele epiteliale ale pancreasului exocrin sau forma granulara in hepatocite, in celulele glandei corticosuprarenale

I.6. Ultrastructura mitocondriilor

La microscopul electronic, mitocondriile au forma sferica si sunt formate din doua membrane trilamelare: membrana externa si membrana interna care trimite in interior prelungiri ce formeaza crestele mitocondriale. Spatiul dintre cele doua membrane se numeste camera externa. Intre membrana interna si crestele mitocondriale se gaseste camera interna (matricea mitocondriala).

Fig. 2 - Aspectul mitocondriei - microscopie electronica

Fig. 3 - Aspectul mitocondriei unde se produce respiratie celulara

(microscop electronic)

I.7. Izolarea mitocondriilor din ficat

Mod de lucru:

- prelevarea ficatului si plasarea acestuia intr-un vas cu apa rece; cantarirea lui pentru un raport de omogenizare;

- maruntirea grosiera cu o foarfeca;

-perfuzarea tesutului cu sol. A rece;

- omogenizarea in sol. A (2mL) timp de 1-2 min;

-diluarea la un raport 1/10 g/v;

-centrifugarea la o viteza de 650×g, 10 min;

-mitocondriile din supernatant se colecteaza printr-o centrifugare ulterioara la 8000 g, 10 min.;

- sedimentul mitochondrial se suspend in 5 mL sol. A si se centrifugheaza la 8000g, 10 min.

(fractie mitocondriala bruta care contine mitocondrii, lizozomi si peroxizomi);

-centrifugarea intr-o eprubeta;

-pipetarea in eprubeta a 3mL de sucroza

- centrifugarea la viteza mare 10000r, 3h → 3 fractii celulare;

- diluarea fractiilor cu o solutie tampon cis-HCl 0,01M, pH=

-centrifugarea la 10 000r, 10 min.

Sol.A: 0,02M tris-HCl, pH 7,4 cu 0,25M sucroza si 0,001 M EDTA.

Solutii de sucroza cu concentratii molare intre 1-2M.